Diferença entre Blunt e Ligação de extremidade pegajosa | Blunt vs Sticky End Ligation
Diferença-chave - Ligação de extremidade sem corte por ligante
As endonucleases de restrição são enzimas específicas que cortam o DNA de cadeia dupla (dsDNA). Eles também são conhecidos como tesoura molecular em biologia molecular. As enzimas de restrição são capazes de reconhecer sequências curtas específicas do dsDNA conhecido como sites de reconhecimento e clivagem de ligações de fosfodiester e hidrogênio para abrir mechas duplas. Como resultado da clivagem por estas enzimas, os fragmentos de DNA são produzidos com diferentes tipos de extremidades, tais como extremidades pegajosas e extremidades bruscas. A ADN-ligase é uma enzima utilizada na biologia molecular para juntar duas vertentes adjacentes de DNA formando novas ligações. O passo é conhecido como ligação e de acordo com o tipo de extremidade de DNA ligada, eles podem ser referidos como ligadura de extremidade romba e ligação de extremidade pegajosa. A diferença fundamental entre a ligadura contundente e a extremidade pegajosa é que a ligadura de extremidade franca ocorre entre fragmentos de DNA que contêm duas extremidades sem corte , enquanto que a ligadura de extremidade adesiva ocorre entre 5 'e 3' de saliência. Em comparação com a ligadura da extremidade romba, a ligação da extremidade pegajosa é mais eficiente e estável.
ÍNDICE
1. Visão geral e diferença de chave
2. O que é Blunt End Ligation
3. O que é Sticky End Ligation
4. Comparação de lado a lado - Blunt vs Sticky End Ligation
5. Resumo
O que é uma ligadura de extremidade contundente?
Algumas endonucleases de restrição podem cortar o DNA nas bases opostas e produzir fragmentos de DNA de extremidade sem corte. Essas enzimas são conhecidas como cortadores finais sem corte; Eles se encaixam diretamente no meio do site de restrição sem deixar bases solitárias simples. As extremidades contundentes também são conhecidas como extremidades não pendentes, uma vez que não possuem bases pendulares 3 'e 5' nas extremidades. Ambas as cadeias terminam a partir de pares de bases em extremidades frouxas. As enzimas comuns de corte sem corte são EcoRV HaeIII, AluI e SmaI.
A ligação ligeira é envolvida entre duas extremidades contundentes. Não é uma ligadura de bases salientes. Essa ligação é menos eficiente do que a ligadura de extremidade pegajosa. No entanto, em algumas ocasiões, a ligadura da extremidade romba torna-se mais vantajosa do que a ligadura da extremidade pegajosa, especialmente quando ligando produtos de PCR. Os produtos de PCR são sempre produzidos com extremidades sem corte. A ligação por extremidade sem corte não exige extremidades complementares no DNA para a ligação.
Figura 01: Produção sem corte pela enzima Eco RV
O que é uma ligadura de extremidade pegajosa?
Algumas endonucleases de restrição são capazes de cortar dsDNA, deixando um pedaço pendente de DNA de cadeia simples no final. Essas extremidades são conhecidas como extremidades pegajosas ou pendentes. A ligação de extremidade pegajosa ocorre entre dois fragmentos de DNA que contêm saliências correspondentes porque as extremidades pegajosas são possuídas com bases não emparedadas e requerem bases complementares para formar ligações. Por isso, é necessário usar a mesma enzima de restrição para ambas as fontes de DNA para produzir os fragmentos de ligação que combinam.
A ligação de extremidade fixa é mais eficiente e muitas vezes é altamente desejável nos processos de clonagem. Existem várias enzimas de restrição que produzem extremidades pegajosas. Eles são EcoRI, BamHI, HindIII, etc.
Figura 02: Produção final pegajosa pela enzima Eco RI
Qual a diferença entre Blunt e Ligação final pegajosa?
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Blunt vs Sticky End Ligation |
|
| A ligação de extremidade sem corte ocorre entre dois fragmentos de DNA de extremidade contundente. | A ligação de extremidade pegajosa ocorre entre dois fragmentos de DNA correspondentes com extremidades pegajosas. |
| Enzimas | |
| Os cortadores finos sem corte produzem extremidades sem corte. | Os cortadores de extremidade pegajosa produzem extremidades pegajosas ou coesivas. |
| Requisito de Matching Ends | |
| Não requer fragmentos de correspondência ou bases complementares. | Requer bases complementares nas extremidades para formar pares de bases. |
| Eficiência | |
| É menos eficiente do que a ligadura de extremidade pegajosa | É mais eficiente do que a ligadura de extremidade sem corte. |
Resumo - Blunt vs Sticky End Ligation
As endonucleases de restrição são capazes de clivar dsDNA e produzir fragmentos de DNA com diferentes extremidades. Eles reconhecem sequências específicas e restringem o DNA criando extremidades pegajosas e contundentes. As extremidades pegajosas têm bases desparejadas no final dos fragmentos. As extremidades sem corte são criadas devido a uma clivagem linear e têm pares de bases nas extremidades. A ligação de extremidade pegajosa requer duas peças complementares de ADN de cadeia simples. A ligação de extremidade sem corte ocorre entre os dois fragmentos de extremidade sem corte. Esta é a diferença entre a ligadura contundente e pegajosa.
Referências:
1. Roberts, Richard J. "Como as enzimas de restrição se tornaram os cavalos de trabalho da biologia molecular. "Procedimentos da Academia Nacional de Ciências. National Acad Sciences, n. d. Rede. 12 de abril de 2017
2. Adnan, Amna. Usos de enzimas de restrição em biotecnologia. N. p., n. d. Rede. 12 de abril de 2017
Cortesia da imagem:
1. "EcoRV Restriction Site". rsh "Por Ramin Herati - Criado com o Inkscape (Public Domain) via Commons Wikimedia
2. "Restriction enzyme Eco RI" Por Tinastella - Trabalho próprio (Public Domain) via Commons Wikimedia
