Diferença Entre Southern, Northern e Western Blot | Southern vs Northern vs Western Blot

Diferença-chave - Northern vs Southern vs Western Blot

A detecção de sequências específicas de DNA, RNA e proteínas é essencial para vários tipos de estudos em biologia molecular. A eletroforese em gel é uma técnica que separa o DNA, o RNA e as proteínas de acordo com seus tamanhos. A partir dos perfis de gel, a sequência de DNA particular, a sequência de ARN ou a proteína são detectadas pelas técnicas especiais chamadas de mancha e hibridação com sondas marcadas. Existem três tipos diferentes de métodos de transferência, nomeadamente o sul, o norte eo oeste. A principal diferença entre o norte e o western blot é o tipo da molécula que detecta de uma amostra. Southern blot é um método que detecta uma sequência de DNA específica a partir de uma amostra de DNA. Northern blot é uma técnica que detecta uma sequência de ARN específica a partir de uma amostra de ARN. Western blot é um método que detecta uma proteína específica de uma amostra de proteína.

ÍNDICE

1. Visão geral e diferença de chave

2. O que é Southern Blot

3. O que é Northern Blot

4. O que é Western Blot

5. Comparação lado a lado - Northern vs Southern vs Western Blot

6. Resumo

O que é Southern Blot?

A técnica Southern Blot foi desenvolvida por E.M. Southern em 1975 para a identificação de uma sequência de DNA específica a partir de uma amostra de DNA. Esta é a primeira técnica de mancha introduzida na biologia molecular. Ele permitiu a detecção de genes específicos do DNA, fragmentos específicos de DNA, etc. Existem várias etapas envolvidas na técnica de transferência de Southern. Eles são os seguintes.

O DNA é isolado da amostra e digerido com endonucleases de restrição.
A amostra digerida é separada por eletroforese em gel de agarose.
Os fragmentos de ADN no gel são desnaturados em cadeias simples pelo uso de uma solução alcalina.
O DNA de cadeia simples é transferido para uma membrana de filtro de nitrocelulose por transferência capilar.
O DNA transferido é fixado na membrana permanentemente.
O DNA fixo na membrana é hibridado com sondas marcadas.
O DNA não ligado é lavado da membrana por lavagem.
O filme de raios-X é exposto à membrana e é preparada uma autorradiografia.

Southern blot é aplicado para diferentes aspectos da biologia molecular.É útil no mapeamento de RFLP, estudos forenses, metilação do DNA na expressão gênica, detecção de genes mutados em distúrbios genéticos, impressão digital de DNA, etc.

Figura 01: Técnica de Blot Southern

O que é Northern Blot?

Northern blot é um método concebido para detectar uma sequência de ARN específica ou sequência de mRNA de uma amostra para estudar a expressão de genes. Esta técnica foi desenvolvida por Alwine, Kemp e Stark em 1979. Ela difere das técnicas de manchas azedo e ocidental devido a várias etapas. No entanto, esta técnica também é realizada através de eletroforese em gel, mancha e hibridação com sondas e detecção marcadas específicas. A técnica Northern Blot é realizada da seguinte forma.

O ARN é extraído da amostra e separado por eletroforese em gel.
O ARN é transferido do gel para uma membrana de mancha e é fixado.
A membrana é tratada com uma sonda marcada preparada a partir de ADNc ou ARN (a sonda é complementar a uma sequência específica na amostra).
A sonda é incubada com a membrana para se ligar a uma sequência específica.
As sondas não controladas são lavadas.
Os fragmentos hibridizados são detectados por uma autorradiografia.

A mancha de Northern é uma ferramenta importante na detecção e quantificação do ARNm hibridizado, estudando a degradação do ARN, a avaliação da semi-vida do ARN, a detecção do splicing de ARN, o estudo da expressão gênica, etc.

Figura 02: Bloqueamento do Norte

O que é Western Blot?

Western blot é um método de detecção de uma proteína específica a partir de uma mistura de proteínas pela utilização de anticorpos marcados. Portanto, western blot também é conhecido como imunoblot . Esta técnica foi introduzida por Towbin et al em 1979 e agora é rotineiramente realizada nos laboratórios para análise de proteínas. Os passos são os seguintes.

As proteínas são extraídas da amostra
As proteínas são separadas pelos seus tamanhos usando eletroforese em gel de poliacrilamida
As moléculas separadas são transferidas para uma membrana PVDF ou membrana de nitrocelulose por eletroporação
A membrana é bloqueada para ligação não específica com a anticorpos
As proteínas transferidas são ligadas com anticorpo primário (anticorpos marcados com enzima).
A membrana é lavada para remover anticorpos primários não ligados especificamente
Os anticorpos associados são detectados pela adição de um substrato e a detecção do precipitado colorido formado

O Western Blot é útil na detecção de anticorpos anti-HIV em uma amostra de soro humano. Western blot também pode ser usado como um teste de confirmação para a infecção por Hepatite B e teste definitivo para a doença das vacas loucas.

Figura 03: Western Blot

Qual a diferença entre Northern Southern e Western Blot?

- diff Artigo Médio antes da Tabela ->

Northern vs Southern vs Western Blot
Tipo de molécula detectada
Northern Blot	Northern blotting detecta uma sequência de ARN específica a partir de uma amostra de ARN.
Southern Blot	Southern blotting detecta uma sequência de DNA específica a partir de uma amostra de DNA.
Western Blot	Western blot detecta uma proteína específica a partir de uma amostra de proteína.
Tipo de Gel
Northern Blot	Isso usa gel de Agarose / formaldeído.
Southern Blot	Isto usa um gel Agarose.
Western Blot	Isto usa gel de poliacrilamida.
Método de Blot
Northern Blot	Esta é uma transferência capilar.
Southern Blot	Esta é uma transferência capilar.
Western Blot	Esta é uma transferência elétrica.
Sondas Usadas
Northern Blot	cDNA ou sondas de RNA marcadas de forma radioativa ou não radioativa.
Southern Blot	As sondas de DNA são rotuladas de forma radioativa ou não radioativa.
Western Blot	Os anticorpos primários são utilizados como sondas.
Sistema de detecção
Northern Blot	Isso é feito usando uma autorradiografia, ou detecção de mudança de luz ou cor.
Southern Blot	Isto é feito usando uma autorradiografia, detecção de mudança de luz ou cor.
Western Blot	Isso é feito usando a detecção de mudança de luz ou cor.

Resumo - Northern vs Southern vs Western Blot

Blot é uma técnica especial desenvolvida para a identificação de DNA, RNA ou proteína específicos das amostras. Há três procedimentos separados de mancha, a saber, norte, sul e oeste, para detectar um tipo específico de molécula. A técnica Northern Blot é projetada para detectar uma sequência de ARN específica a partir de uma mistura de ARN. A técnica Southern Blot permite a detecção de uma sequência de DNA específica a partir de uma amostra de DNA e a técnica Western Blot é desenvolvida para identificar uma proteína específica de uma mistura de proteína.

Referências

1. Gibbons, Janay. "Western Blot: Protein Transfer Overview. "North American Journal of Medical Sciences". Medknow Publications & Media Pvt Ltd, março de 2014. Web. 27 de março de 2017

2. Brown, T. "Southern blot. "Protocolos atuais em imunologia. U. S. Biblioteca Nacional de Medicina, maio de 2001. Web. 27 de março de 2017

3. Ele, Shan L. "Northern blot. "Métodos em enzimologia. U. S. Biblioteca Nacional de Medicina, 2013. Web. 27 de março de 2017

Cortesia da imagem:

1. "Northern Blot Scheme" por RNA405 - Trabalho próprio (domínio público) via Commons Wikimedia

2. "Western blot 114A" Por Amanthabagdon - Trabalho próprio (Domínio Público) via Commons Wikimedia