Diferença entre SYBR Green e Taqman | SYBR Green vs Taqman

Diferença-chave - SYBR Green vs Taqman

SYBR Green e Taqman são dois métodos empregados para detectar ou assistir o processo de amplificação de PCR em tempo real. SYBR Green é um método baseado no corante de coloração de ácido nucleico intercalante enquanto Taqman é um método baseado na sonda de hidrólise. Ambas as tecnologias são projetadas para gerar fluorescência durante a PCR, o que permite que a máquina de PCR em tempo real monitore a reação em "tempo real". O método SYBR Green é realizado utilizando um corante fluorescente chamado SYBR verde e detecta a amplificação por ligação do corante ao DNA de cadeia dupla produzido. O Taqman é realizado utilizando sondas de marcação dupla e detecta a amplificação por degradação da sonda por Taq polimerase e libertações do fluoróforo. Esta é a principal diferença entre SYBR Green e Taqman.

ÍNDICE

1. Visão geral e diferença de chave

2. O que é SYBR Green

3. O que é Taqman

4. Comparação lado a lado - SYBR Green vs Taqman

5. Resumo

O que é SYBR Green?

SYBR Green é um corante fluorescente usado para manchar ácidos nucleicos, especialmente o DNA de cadeia dupla na Biologia Molecular. O método SYBR Green é usado para quantificar produtos de PCR durante a PCR em tempo real. Uma vez que se liga ao DNA, o complexo resultante de dente de DNA absorve luz azul e emite luz verde intensa. Isso acontece devido à mudança estrutural que ocorre na molécula de corante após a ligação com DNA de cadeia dupla. Quando o PCR cria mais e mais DNA, mais moléculas de corantes se ligam ao DNA, gerando mais fluorescência. Portanto, a fluorescência aumenta com a acumulação de produtos de PCR. Assim, a quantidade de produto de PCR pode ser medida quantitativamente pela detecção de fluorescência verde SYBR.

O corante verde SYBR também pode ser usado para rotulagem de DNA em citometria e microscopia fluorescente. O brometo de etídio foi substituído com sucesso por SYBR Green, pois o brometo de etídio é um corante cancerígeno com problemas de eliminação durante a visualização do DNA na eletroforese em gel.

Existem vantagens e desvantagens do método verde SYBR. Este método é muito sensível, barato e fácil de usar. No entanto, devido à sua capacidade de ligação a qualquer ADN de cadeia dupla, a ligação não específica pode levar a uma quantificação excessiva do produto de PCR.

Figura 01: técnica verde SYBR

O que é Taqman?

Taqman é um método alternativo para o SYBR Green para monitorar o processo de PCR em tempo real. Este método depende da actividade de exonuclease 5 '- 3' da enzima Taq polimerase para degradar as sondas durante a extensão da nova cadeia e libertação de fluoróforo.As sondas de marcação dupla são utilizadas neste método e é baseada na hidrólise de sondas. As sondas são oligonucleótidos de ADN marcados fluorescentemente com uma molécula repórter fluorescente (fluoróforo) na extremidade 5 'e uma molécula de extinção na extremidade 3'. Eles são projetados para se ligar ao modelo de cadeia simples no lado oposto do recozimento de iniciadores. A polimerase Taq adiciona nucleotídeos ao iniciador e prolonga a nova cadeia para as sondas rotuladas duplas. Uma vez que a polimerase Taq atende a sonda, a ação exonuclease da polimerase Taq ativa e degrada a sonda. Uma vez que completa a síntese da nova vertente, a sonda é submetida a completa degradação e liberação do fluoróforo. A liberação de fluoróforo gera fluorescência. A molécula fluorescente de Quencher apaga eficientemente a luz emitida e cria a saída para a quantificação do produto de PCR. A liberação de fluoróforos e a quantidade dos produtos de PCR são proporcionais. Assim, a quantificação pode ser feita facilmente pelo método de Taqman.

Figura 02: Método Taqman

O método Taqman é usado em PCR em tempo real, quantificação da expressão gênica, detecção de polimorfismos genéticos, quantificação de deleções de DNA cromossômico, identificação bacteriana, verificação de análise microarray, genotipos SNP, etc. Qual a diferença entre SYBR verde e Taqman?

- diff Artigo Médio antes da Tabela ->

SYBR Green vs Taqman

SYBR Green é baseado em corante de ligação de DNA.
Taqman dependem de sondas de hibridação e actividade exonuclease 5 'a 3' de Taq polimerase.	Sondas com etiquetas fluorescentes
Não são necessárias sondas com marcação fluorescente.
Sondas de rotina dupla são necessárias.	Multiplex Gene Analysis
Não pode ser usado para alvos de genes multiplex.
Pode ser usado para alvos de genes multiplex.	Custo
Isso é menos dispendioso.
Isso é mais caro.	Especificidade
Isto é menos específico e se liga a qualquer DNA de cadeia dupla
Estes são altamente específicos, uma vez que as sondas detectam os produtos de amplificação específicos.	Eficácia
Isso é menos efetivo.
Isso é altamente efetivo.	Aplicação
Isto é usado em PCR em tempo real, visualização de gel de agarose, rotulação de DNA, etc.
Isto é usado em PCR em tempo real, quantificação da expressão gênica, detecção de polimorfismos genéticos, etc.	Resumo - SYBR Green e Taqman

Taqman e SYBR verde são dois métodos empregados em PCR em tempo real (PCR quantitativa). Ambos os métodos permitem a quantificação do produto de PCR de forma eficiente e dependem da emissão da fluorescência. O método de Taqman usa sondas de rotina dupla para detecção do DNA acumulado enquanto o método SYBR Green usa um corante fluorescente. Ambos os métodos também possuem diferentes aplicações em biologia molecular.

Referência:

1. Tajadini, Mohamad Hasan, Mojtaba Panjehpour e Shaghayegh Haghjooy Javanmard. "Comparação dos métodos SYBR Green e TaqMan em análise quantitativa em tempo real da reação em cadeia da polimerização de quatro subtipos de receptores de adenosina."Pesquisa biomédica avançada. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, 2014. Web. 13 de março de 2017.

2. "Princípios básicos de PCR em tempo real. "PCR em tempo real, Quantitative (qPCR), Primers & Mastermix: Primerdesign Ltd. N. p., n. d. Rede. 13 de março de 2017.

3. "SYBR Green e outros corantes de PCR em tempo real. "Biocompareiro. N. p., 05 de abril de 2010. Web. 14 de março de 2017

Cortesia da imagem:

1. "PCR com SYBR verde" By-Ygonaar 23: 09, 7 de março de 2006 (UTC) - É um gráfico criado por Ygonaar com Power point, CC BY-SA 3. 0, // commons. wikimedia. org / w / index. php? curid = 619528

2. "Taqman" Por Usuário: Braindamaged - Trabalho próprio (Domínio Público) via Commons Wikimedia