Diferença entre ELISA direto e indireto | Direct vs Indirect ELISA

Diferença-chave - ELISA direto versus indireto

Um imunoensaio ligado a enzimas (ELISA), também conhecido como imunoensaio enzimático, é um teste sorológico que detecta anticorpos no sangue . É usado como uma ferramenta de diagnóstico para descobrir se o paciente foi exposto a um tipo particular de vírus ou a outro agente infeccioso (antígeno) e se o corpo produziu anticorpos contra a infecção. O ELISA também pode identificar as infecções passadas e atuais. Assim, o ELISA é freqüentemente usado como um teste de pré-seleção pelos médicos antes da análise aprofundada de doenças. Este teste pode ser realizado no laboratório, tomando uma amostra de sangue do paciente. Existem dois tipos de teste ELISA: ELISA direto e ELISA indireto. A principal diferença entre ELISA direto e indireto é que ELISA indireto é mais sensível e requer a adição de um anticorpo secundário enquanto ELISA direto é menos sensível e usa apenas um anticorpo primário .

ÍNDICE

1. Visão geral e diferença de chave

2. O que é o ELISA direto

3. O que é o ELISA indireto

4. Comparação lado a lado - Direct versus Indirect ELISA

5. Resumo

O que é o ELISA direto?

O ELISA é um teste de diagnóstico de doença realizado para identificar a presença de antígenos ou anticorpos particulares no sangue. É feito como um ensaio de placa. Usa anticorpos ligados a enzimas facilmente testadas. A presença de antígenos na amostra de soro liga-se a anticorpos específicos ligados a enzimas. No passo final, um substrato específico é adicionado para reagir com a enzima. A enzima converte o substrato em um produto colorido ou produzindo sinal. A mudança de cor no substrato químico revela a presença de um anticorpo particular na amostra de soro. O teste ELISA direto usa apenas um anticorpo primário ligado à enzima. Após a ligação ao antígeno, ele muda rapidamente a cor, indicando a presença do agente infeccioso no sangue. No entanto, a intensidade dos sinais é mais fraca no ELISA direto, uma vez que os epítopos estão limitados à ligação dos antígenos. Portanto, o ELISA direto é menos sensível em relação ao ELISA indireto.

Figura 01: teste ELISA direto

O que é ELISA indireto?

O ELISA pode ser realizado utilizando dois tipos de anticorpos, nomeadamente; anticorpo primário e anticorpo secundário. A ferramenta ELISA indireta usa ambos os tipos de anticorpos para amplificar os sinais para uma melhor detecção. A técnica ELISA indireta é realizada da seguinte forma.

1. As placas são incubadas com antígenos e lavadas para bloquear a ligação não específica.
2. Em seguida, os anticorpos primários são adicionados e lavados.
3. Os anticorpos secundários ligados à enzima são adicionados e lavados.
4. Adiciona-se um substrato e deixa-se reagir com enzimas.
5. Os sinais são detectados e a presença ou ausência do antígeno específico na amostra é identificada.

No teste ELISA indireto, vários anticorpos secundários podem se ligar a um único anticorpo primário. Os anticorpos secundários estão ligados com enzimas facilmente testadas. Portanto, uma ligação pode fazer um sinal forte devido a mais de uma interação. Portanto, o ELISA indireto é mais sensível do que o ELISA direto. No entanto, o ELISA indireto pode produzir sinais inespecíficos devido a reações cruzadas dos anticorpos secundários.

Figura 02: teste ELISA indireto

Qual a diferença entre ELISA direto e indireto?

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Direct versus Indirect ELISA
O ELISA direto é menos sensível em relação ao ELISA indireto.	O ELISA indireto é mais sensível.
Tempo Tomado
O teste ELISA direto é um processo rápido.	O ELISA indireto é demorado.
Uso de anticorpos
Apenas um tipo de anticorpos (anticorpos primários) são utilizados em ELISA direto.	Os anticorpos primários e secundários são utilizados para o ELISA indireto.
Link with Enzymes
Os anticorpos primários estão ligados a enzimas.	Os anticorpos secundários estão ligados a enzimas.
Reatividade cruzada dos segundos anticorpos
O ELISA direto elimina a reatividade cruzada dos segundos anticorpos.	O ELISA indireto é afetado pela reatividade cruzada dos segundos anticorpos.
Sinais
Os sinais são fracos em comparação com o ELISA indireto.	Os sinais são amplificados em ELISA indireto. Por isso, é fácil de detectar.

Resumo - ELISA direto versus indireto

O ELISA é uma técnica bioquímica usada principalmente em imunologia para detectar a presença de um anticorpo ou um antígeno na amostra de sangue de um paciente. Pode ser realizada através de dois processos conhecidos como ELISA direto ou indireto. O teste ELISA direto usa apenas anticorpos primários para detectar o antígeno enquanto o ELISA indireto usa anticorpos primários e secundários. Em ELISA direto, os anticorpos primários são rotulados, enquanto que em anticorpos secundários indiretos ELISA são rotulados. Esta é a diferença entre ELISA direto e indireto.

Referências

1. "O ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). "Boletim da Organização Mundial da Saúde". U. S. Biblioteca Nacional de Medicina, 1976. Web. 29 de março de 2017

2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen e J. Van Der Veen. "Ensaio de imunoabsorção enzimática que usa antígeno marcado para detecção de anticorpos de imunoglobulina M e A em toxoplasmose: comparação com imunofluorescência indireta e ensaio de imunossorrente com enzima em dois índices. "Journal of Clinical Microbiology. U. S. Biblioteca Nacional de Medicina, junho de 1983. Web. 29 de março de 2017

Cortesia da imagem:

1. "Diagrama ELISA" Por Cavitri - Trabalho próprio (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia

2. "ELISA Indireto" Por Cawang - Trabalho próprio (CC0) via Commons Wikimedia