Diferença entre imunofluorescência e imuno-histoquímica | Imunofluorescência vs Imuno-histoquímica
Diferença-chave - Imunofluorescência vs Immunohistochemistry
O diagnóstico de doenças, que utiliza métodos de biologia molecular, tornou-se uma área emergente da tecnologia de laboratório clínico. Inclui todos os testes e métodos para identificar uma doença e compreender a causa de uma doença através da análise de DNA, RNA ou proteínas expressas em um organismo. Avanços rápidos no diagnóstico molecular permitiram pesquisas básicas sobre doenças transmissíveis e não transmissíveis. Estes são usados para determinar mudanças na sequência ou níveis de expressão em genes ou proteínas cruciais envolvidos na doença. A imunofluorescência (IF) e a imuno-histoquímica (IHC) são duas técnicas tão amplamente utilizadas na biologia do câncer. IF é um tipo de IHC onde um método de detecção de fluorescência é usado para analisar anticorpos monoclonais e policlonais, enquanto o IHC usa métodos químicos para detectar anticorpos monoclonais e policlonais. Esta é a principal diferença entre IF e IHC.
ÍNDICE
1. Visão geral e diferença de chave
2. O que é Immunofluorescência
3. O que é imuno-histoquímica
4. Semelhanças entre imunofluorescência e imuno-histoquímica
5. Comparação lado a lado - Imunofluorescência versus imuno-histoquímica na forma tabular
6. Resumo
O que é Immunofluorescence (IF)?
A imunofluorescência é uma técnica de detecção em que os anticorpos utilizados no ensaio são rotulados usando corantes fluorescentes ou proteínas fluorescentes para fins de detecção. Os anticorpos secundários rotulados podem resultar em sinais de fundo indesejados; Portanto, a técnica IF se baseia na rotulagem do próprio anticorpo primário no presente para evitar sinais indesejados durante a detecção. Através desta técnica, a ligação não específica entre o anticorpo primário e secundário é prevenida, e é mais rápida, pois não há nenhum passo de incubação secundário envolvido. A qualidade dos dados também é melhorada.
Figura 01: Coloração de imunofluorescência dupla para BrdU, NeuN e GFAP
Fluorocromos ou corantes fluorescentes são compostos que podem absorver radiação, de preferência radiação ultravioleta que está excitada. Quando as partículas atingem o estado fundamental do estado excitado, elas emitem radiação que é capturada e detectada por um detector para formar um espectro.É de grande importância que o rótulo fluorescente seja compatível e estável para a reação particular e deve ser devidamente conjugado com o anticorpo para obter resultados precisos. Um dos fluoroquromos mais utilizados é o isotiocianato de fluoresceína (FITC), que é de cor verde, com comprimentos de onda de pico de absorção e emissão de 490 nm e 520 nm, respectivamente. Rhodamine, outro agente utilizado em IF, é de cor vermelha e tem comprimentos de onda de pico e absorção distintos de 553 nm e 627 nm.
O que é imuno-histoquímica (IHC)?
IHC é um método de teste molecular praticado para identificar e confirmar a presença do antígeno na célula alvo. A célula-alvo pode ser uma partícula infecciosa, um patógeno microbiano ou uma célula tumoral maligna. IHC utiliza anticorpos monoclonais e policlonais para determinar a presença de antígenos presentes na superfície celular das células alvo. A técnica é baseada na ligação antigénio-anticorpo. Um marcador de detecção é conjugado com estes anticorpos para detectar a presença ou a ausência do antigénio particular. Estes marcadores podem ser marcadores químicos tais como enzimas, anticorpos marcados de forma fluorescente ou anticorpos marcados com rádio.
Figura 02: Fatia do rato-cérebro corada por imuno-histoquímica
A aplicação mais popular de IHC está em biologia celular de câncer para identificar a presença de tumores malignos, mas também é usada para a detecção de doenças infecciosas.
Quais são as semelhanças entre imunofluorescência e imuno-histoquímica?
- A imunofluorescência ea imuno-histoquímica ocorrem sob condições in vitro.
- Ambas as técnicas são baseadas no antígeno-anticorpo
- Ambos são técnicas muito rápidas.
- Os resultados das técnicas são reprodutíveis.
- Ambos têm melhorado a qualidade dos dados.
- Estas técnicas utilizadas no diagnóstico de câncer e doenças infecciosas.
Qual a diferença entre imunofluorescência e imuno-histoquímica?
- diff Artigo Médio antes da Tabela ->
Imunofluorescência vs Imuno-histoquímica |
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| IF é uma técnica de detecção em que os anticorpos utilizados no ensaio são rotulados usando corantes fluorescentes ou proteínas fluorescentes para detecção. | IHC é uma técnica de detecção em que os anticorpos utilizados no ensaio são rotulados usando produtos químicos ou elementos radioativos para detecção. |
| Precisão | |
| A precisão é maior na técnica IF em comparação com IHC. | A precisão é menor no IHC. |
| Especificidade | |
| IF é mais específico. | IHC é menos específico. |
Resumo - Imunofluorescência versus imuno-histoquímica
Os mecanismos moleculares provocaram muitas mudanças no campo da medicina, dando origem a métodos avançados de teste molecular que provocaram revoluções no campo dos diagnósticos. Essas invenções levaram a uma identificação e confirmação rápida e precisa da doença, permitindo assim a administração e produção de drogas com sucesso. Estas técnicas também são utilizadas em farmacologia para encontrar os alvos de drogas e para confirmar as propriedades farmacocinéticas do fármaco durante o metabolismo do fármaco.IF e IHC são dois métodos de diagnóstico baseados no conceito de antígeno e ligação de anticorpos, embora o modo de detecção em ambas as técnicas seja diferente. IF usa o princípio da fluorescência para detectar o antígeno e o IHC usa o conceito de conjugação química para detectar o antígeno. Esta é a diferença entre IF e IHC.
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Referências:
1. Aoki, Valéria, et al. "Imunofluorescência direta e indireta. "Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, disponível aqui. Acessado em 25 de agosto de 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Aplicações de imuno-histoquímica. "Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, agosto de 2012, disponível aqui. Acessado em 25 de agosto de 2017.
Cortesia da imagem:
1. "Misturas de imunofluorescência dupla para BrdU, NeuN e GFAP" Por Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Entrega intranasal do fator de crescimento transformante-beta1 em os ratos após o acidente vascular cerebral reduzem o volume do infarto e aumentam a neurogênese na região subventricular; PMID 19077183 (CC BY 2. 0) via Commons Wikimedia
2. "Hypothalamus de um tecido de rato manchado por ABC-Immunohistochemistry" Por zabbn - Trabalho próprio (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia
