Diferença entre SDS Page e Western Blot | SDS Page vs Western Blot
Diferença-chave - Página SDS versus Western Blot
Western blot é uma técnica que detecta uma proteína específica a partir de uma amostra de proteína. Esta técnica é realizada através de várias etapas principais: eletroforese em gel, mancha e hibridação. A eletroforese em gel de poliacrilamida de dodecilsulfato de sódio (página SDS) é um tipo de técnica de eletroforese em gel que é usada para separar proteínas de acordo com seus tamanhos (pesos moleculares). Western blot é uma folha especial de uma membrana de transferência que é usada para transferir o mesmo padrão das proteínas na página SDS. A principal diferença entre SDS Page e western blot é que SDS Page permite a separação de proteínas em uma mistura enquanto western blot permite a detecção e quantificação de uma proteína específica de uma mistura. Ambos são úteis em estudos de análise de proteínas.
ÍNDICE
1. Visão geral e diferença de chave
2. O que é SDS Page
3. O que é Western Blot
4. Comparação lado a lado - SDS Page vs Western Blot
5. Resumo
O que é SDS Page?
SDS Page é uma técnica de eletroforese em gel usada para a separação de proteínas. É comumente usado em bioquímica, genética, forense e biologia molecular. Uma vez que as proteínas são extraídas da amostra, elas são executadas em um gel composto de SDS e poliacrilamida. SDS é um detergente aniónico que é usado para linearizar proteínas (proteínas de desnaturação) e para transmitir uma carga negativa a proteínas linearizadas proporcionais à sua massa molecular. A poliacrilamida torna-se o suporte sólido para o gel. As proteínas desnatadas que são carregadas negativamente migram para a extremidade positiva do aparelho através do gel. De acordo com o tamanho das proteínas, as velocidades de migração diferem entre as proteínas e a separação ocorre. Portanto, a página SDS é útil para a separação de proteínas individuais com base em seus tamanhos.
A preparação do gel de poliacrilamida para o fraccionamento de proteínas é um passo crucial na página SDS. A concentração correta de poliacrilamida e o tipo de agente de reticulação utilizado afetam fortemente as propriedades físicas do gel, o que faz a separação real das diferentes proteínas. Os tamanhos de poro do gel devem ser devidamente gerenciados para uma separação efetiva. No entanto, a página SDS é considerada como uma técnica de separação de proteínas de alta resolução.
A técnica da página SDS tem uma grande limitação na análise de proteínas. Uma vez que a SDS desnatura as proteínas antes da separação, não permite a detecção de atividade enzimática, interações de ligação à proteína, cofactores de proteínas, etc.
Figura 01: Página SDS
O que é Western Blot?
A técnica Western Blot permite a detecção de uma proteína específica a partir de uma mistura de proteínas e a medida da quantidade e do peso molecular da proteína. Western blot é a membrana utilizada durante o procedimento de transferência para obter a imagem espelhada dos padrões de proteína no gel SDS-poliacrilamida. A membrana que é utilizada para Western Blot é constituída principalmente por nitrocelulose ou difluoreto de polivinilideno (PVDF). A membrana com a proteína transferida pode ser usada para identificar a proteína desejada. Requer anticorpos de alta qualidade para a detecção da proteína desejada por hibridação. O anticorpo liga-se ao seu antigénio específico e revela a presença do antigénio desejado que é uma proteína.
A transferência das proteínas do gel de poliacrilamida SDS para o western blot é realizada por electroblotting. É um método eficaz e rápido que faz com que as proteínas sejam submetidas a eletroforese fora do gel e passem para a membrana de nitrocelulose (Western blot).
Figura 02: Western Blot
Qual a diferença entre SDS Page e Western Blot?
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SDS Page vs Western Blot |
|
| SDS Page é uma técnica de eletroforese em gel. | Western blot é uma técnica que é realizada em uma membrana para detectar uma proteína específica de uma mistura. |
| Use | |
| A página SDS permite a separação de proteínas de acordo com seus tamanhos. | Western blot permite a transferência de proteínas no gel da página SDS sem alterar o padrão e permite a hibridação com anticorpos específicos. |
| Desvantagens | |
| A desnaturação de proteínas, alto custo e a presença de produtos químicos de neurotoxina são as desvantagens dessa técnica. | Esta técnica é demorada e requer uma boa experiência, condições pessoais e específicas controladas. |
Resumo - SDS Page vs Western Blot
A página SDS e western blot são dois métodos envolvidos na análise de proteínas. A página SDS permite uma fácil separação das proteínas em um gel de acordo com seu peso molecular. Western blot ajuda a confirmar a presença e quantidade de uma proteína específica através da hibridação com anticorpos específicos. Esta é a diferença entre SDS Page e western blot.
Referências:
1. Blancher, C. e A. Jones. "SDS-PAGE e Western Blot Techniques. "Métodos em medicina molecular. U. S. Biblioteca Nacional de Medicina, n. d. Rede. 27 de março de 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig e David H. Petering. "SDS-PAGE nativa: separação eletroforética de alta resolução de proteínas com retenção de propriedades nativas, incluindo iões de metal encadernados. "Metallomics: ciência biometal integrada. U. S. Biblioteca Nacional de Medicina, maio de 2014. Web. 27 de março de 2017.
Cortesia da imagem:
1. "SDS-PAGE Electrophoresis" Por Bensaccount na Wikipedia em inglês (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" Por Amanthabagdon - Trabalho próprio (Domínio Público) via Commons Wikimedia
