Diferença entre Maxam Gilbert e Sanger Seqüenciamento | Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Diferença-chave - Maxam Gilbert vs Seqüência de Sanger
Os nucleotídeos são as unidades estruturais básicas e os blocos de construção do DNA. A molécula de DNA é composta por uma cadeia polinucleotídica. Existem quatro nucleótidos diferentes encontrados no DNA. Esses nucleotídeos são compostos por quatro bases azotadas diferentes denominadas A (adenina), G (guanina), C (citosina), T (timina). A ordem dos nucleotídeos na molécula de DNA tem uma grande importância, pois codifica uma importante informação genética para o crescimento e o desenvolvimento dos organismos. A sequenciação de DNA refere-se ao processo que determina a sequência de nucleótidos precisa do DNA. Existem diferentes métodos de seqüenciamento de DNA. A sequenciação de Maxam Gilbert e a sequenciação de DNA de Sanger são dois métodos de seqüenciamento de DNA que pertencem à seqüenciamento de primeira geração. O procedimento de sequenciação de Maxam Gilbert determina a sequência de base clivando quimicamente os fragmentos de ADN marcados com extremidades 5 'preferencialmente em cada um dos quatro nucleotídeos e eletroforese em gel. O procedimento de sequenciação de Sanger determina a sequência de nucleótidos através da síntese de DNA de cadeia simples utilizando ADN polimerase e didesoxinucleótidos e eletroforese em gel. Esta é a principal diferença entre Maxam Gilbert e Sanger Sequencing.
ÍNDICE
1. Visão geral e diferença de chave
2. O que é Maxam Gilbert
3. O que é Sanger Sequencing
4. Comparação lado a lado - Maxam Gilbert vs Seqüência Sanger
5. Resumo
O que é a sequenciação de Maxam Gilbert?
A sequenciação de Maxam Gilbert, também conhecida como método de seqüência química , é uma técnica que foi desenvolvida para determinar a ordem dos nucleotídeos no DNA. Este método foi introduzido por Walter Gilbert e Alan Maxam em 1976 e tornou-se popular, pois pode ser realizado diretamente com DNA purificado. O método de Maxam Gilbert pertence à primeira geração de seqüenciamento de DNA, e foi o primeiro método de seqüência usado amplamente pelos cientistas.
O princípio básico deste método reside na restrição dos fragmentos de DNA marcados a extremidade em bases específicas por substâncias químicas específicas da base e condições e separação dos fragmentos marcados por eletroforese como mostrado na figura 01. Os fragmentos são separados de acordo com os seus tamanhos no gel. Uma vez que os fragmentos são rotulados, a sequência da molécula de DNA pode ser facilmente deduzida.
O método Maxam Gilbert utiliza substâncias químicas específicas da base para quebrar o DNA em bases específicas. Dois produtos químicos comuns chamados produtos químicos de sulfato de dimetilo e hidrazina são usados para atacar seletivamente purinas e pirimidinas, respectivamente.
O método de sequenciação de Maxam Gilbert é realizado através de várias etapas como segue.
- Purificação da sequência de ADN utilizando endonucleases de restrição
- Etiquetagem das extremidades dos fragmentos de ADN por adição de fosfatos radioactivos
- Purificação dos fragmentos marcados a partir de fragmentos não marcados por electroforese em gel
- Separação da extremidade- DNA rotulado em quatro tubos e tratamento com produtos químicos específicos de base separadamente
- Eletroforese do conteúdo de cada tubo em linhas separadas em um gel e separação de fragmentos de acordo com seu comprimento.
- Detecção dos fragmentos por autorradiografia.
Figura 01: Secagem de Maxam Gilbert
O que é Seqüenciamento de Sanger?
Sanger Sequencing é um método de sequenciação desenvolvido por Frederick Sanger e seus colegas em 1977 para determinar a seqüência básica de um determinado fragmento de DNA. Também é conhecido como método de sequenciação de terminação de cadeia ou Dideoxi. Este método trabalha no princípio da incorporação seletiva de didesoxinucleótidos terminadores de cadeia (ddNTPs) tais como ddGTP, ddCTP, ddATP e ddTTP por DNA polimerase durante a síntese de DNA de cadeia simples para terminar a formação da cadeia. Os didodeoxinucleótidos não possuem grupos 3 'OH para a formação de ligações fosfodiéster com nucleótido adjacente. Assim, a formação da cadeia pára uma vez que um ddNTP é incorporado na cadeia de formação recém-formada durante a seqüência do Sanger.
Neste método, quatro reações separadas de síntese de DNA (PCR) são realizadas em quatro tubos separados com um tipo de ddNTP. Outros requisitos também são fornecidos para os tubos para PCR, incluindo primers, dNTPs, Taq polymerase, condições específicas, etc. Quatro reações separadas são realizadas em quatro tubos com quatro misturas. Após as reações de PCR, os fragmentos de DNA resultantes são desnaturados por calor e separados por eletroforese em gel. Em seguida, os fragmentos são visualizados usando um iniciador (dano ou radioativo ou fluorescente) rotulado ou dNTPs como mostrado na figura 02.
Figura 02: Secagem de Sanger
Qual a diferença entre Maxam Gilbert e Sanger Sequencing?
- diff Artigo Médio antes da Tabela ->
Maxam Gilbert vs Seqüência Sanger |
|
| A seqüência de Maxam Gilbert é a primeira técnica desenvolvida para o seqüenciamento de DNA. | O método de sequenciação de Sanger foi introduzido após o método de sequenciação de Maxam Gilbert. |
| Uso | |
| Este método raramente é usado. | O seqüenciamento de Sanger é rotineiramente usado para seqüenciamento. |
| Uso de produtos químicos perigosos | |
| Ele usa produtos químicos perigosos. | O uso de produtos químicos perigosos é limitado em comparação com o método de Maxam Gilbert. |
| Rotulagem para detecção | |
| Este método utiliza radioativo P 32 para rotular as extremidades dos fragmentos de DNA. | A seqüência de Sanger usa ddNTPs radiactivamente ou com marcação fluorescente. |
Resumo - Maxam Gilbert vs Seqüência de Sanger
Maxam Gilbert e seqüenciamento de Sanger são dois tipos de técnicas de seqüenciamento de DNA que se enquadram em sequenciação de DNA de primeira geração.A sequenciação de Maxam Gilbert é o primeiro método introduzido para o seqüenciamento de DNA em 1976, e é realizado através da quebra dos fragmentos de DNA rotulados por substâncias químicas específicas da base. Assim, é conhecido como seqüenciamento químico. O método de sequenciação de Sanger foi introduzido em 1977 e é baseado nas reações de terminação da cadeia conduzida por ddNTP. Método de seqüência de Sanger popular do método de Maxam Gilbert devido a várias desvantagens do método de Maxam Gilbert, como o consumo excessivo de tempo, o uso de produtos químicos perigosos, etc. Esta é a diferença entre o seqüenciamento Maxam Gilbert e Sanger.
Referências:
1. Maxam, A. M e Walter Gilbert. "Um novo método para seqüenciar o DNA. "Procedimentos da Academia Nacional de Ciências. National Acad Sciences, 9 de dezembro de 1976. Web. 30 de março de 2017
2. Heather, James M. e Benjamin Chain. "A seqüência de sequenciadores: a história de seqüenciamento de DNA. "Genômica. Academic Press, janeiro de 2016. Web. 30 de março de 2017
3. Pareek, Chandra Shekhar, Rafal Smoczynski e Andrzej Tretyn. "Seqüenciamento de tecnologias e sequenciação do genoma. "Journal of Applied Genetics. Springer-Verlag, novembro de 2011. Web. 30 de março de 2017
Cortesia da imagem:
1. "Secagem de Maxam Gilbert" por vários tempos na Wikipédia em inglês (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia
2. "Sanger-sequencing" Por Estevezj - Trabalho próprio (CC BY-SA 3. 0) via Commons Wikimedia
