Diferença entre clonagem e subclonagem | Clonagem vs subclonagem

Diferença-chave - Clonagem vs subclonagem

Clonagem e subclonagem são procedimentos biológicos moleculares que criam células geneticamente idênticas ou organismos que possuem o DNA ou o gene que são de interesse. A clonagem é uma técnica que envolve a inserção do gene ou DNA interessado em um vetor, replicação do mesmo dentro de uma bactéria hospedeira e produção de células ou organismos que são cópias exatas da maquiagem genética. A subclonagem é uma técnica que envolve a inserção do gene de interesse, que já está inserido em um vetor, em um vetor secundário, replicação dentro de uma bactéria hospedeira e produção de cópias de células ou organismos geneticamente idênticos. A principal diferença entre clonagem e subclonagem é que, na clonagem, o gene de interesse, uma vez ligado a um vetor, continua o processo de clonagem enquanto que, na subclonagem, o gene de interesse já clonado é separado do vetor pai e inserido novamente em um vetor destinatário e continue o processo .

ÍNDICE

1. Visão geral e diferença de chave

2. O que é Cloning

3. O que é Subcloning

4. Comparação lado a lado - Cloning vs Subcloning

5. Resumo

O que é Cloning?

A clonagem é o procedimento que produz organismos ou células geneticamente idênticos. Na natureza, a clonagem ocorre nos meios de reprodução assexuada. Quando não há recombinação ou alteração genética, as células filhas recebem a mesma composição genética do pai. Os organismos procarióticos e eucarióticos criam clones por fissão binária, brotação, mitosis, etc. Na biologia molecular, os genes de clonagem ou fragmentos específicos de DNA são um método popular para estudar a estrutura e a função dessa seção particular de DNA.

O principal objetivo da clonagem molecular é fazer milhões de cópias de células ou organismos geneticamente idênticos com o fragmento de DNA de interesse (principalmente genes). Ele cria organismos com cópias genéticas exatas de outro. Principalmente, genes específicos são clonados em estudos moleculares para obter informações estruturais e funcionais e para seqüenciamento de DNA. Além disso, para a produção de proteínas ou produtos específicos em larga escala, a clonagem é amplamente utilizada.

Procedimento de clonagem

Os passos básicos do procedimento de clonagem são os seguintes.

1. Identificação e isolamento do gene de interesse. (Amplificação do gene de interesse por PCR).
2. Digestão de restrição do gene de interesse (Restriction endonuclease cut the gene).
3. Digestão de restrição do DNA do vetor.(O DNA do vetor também é cortado usando a mesma endonuclease de restrição).
4. Inserção do gene no vetor e formação da molécula recombinante.
5. Transformação do vetor recombinante em uma bactéria hospedeira.
6. Isolamento e identificação das bactérias transformadas (o vetor plasmídico deve conter um gene selecionável, mais comumente um gene de resistência a antibióticos para produzir bactérias transformadas).
7. Expressão genética recombinante dentro do hospedeiro.

Figura_01: Procedimento de clonagem

O que é subclonagem?

A subclonagem é um procedimento de mover um gene de interesse de um vetor para outro vetor para ver a expressão do gene para obter a funcionalidade desejada do gene. Neste método, dois vetores estão envolvidos; nomeadamente vetor pai e vetor de destino. As inserções clonadas são movidas novamente para um segundo vetor na subclonagem. O objetivo de transferir o gene do primeiro vetor para o segundo vetor é obter algo que não poderia ser feito pelo primeiro vetor ou para separar um gene novamente dentro do fragmento de DNA já clonado e expressá-lo sozinho. As enzimas de restrição são usadas neste procedimento no início.

Procedimento de subclonagem

Os passos básicos da subclonagem são os seguintes.

1. Com a ajuda de endonucleases de restrição, separação do DNA de interesse no plasmídeo doador (vetor parental).
2. Amplificação do DNA de interesse utilizando PCR.
3. Purificação do produto de PCR (DNA de interesse) por eletroforese em gel.
4. Abertura do plasmídeo receptor pelas mesmas endonucleases de restrição usadas para separar DNA de interesse no plasmídeo original.
5. Ligação do ADN de interesse (gene) no plasmídeo receptor para criar o plasmídeo subclonado.
6. Transformação do vetor subclonado em uma bactéria hospedeira competente.
7. Triagem de células transformadas.
8. Purificação do ADN plasmídico e uso para sequenciação de DNA ou expressão dos genes para obter os produtos desejados.

A subclonagem é realizada em ocasiões de isolar um gene do grupo clonado de genes ou quando o gene de interesse é necessário para transferir para um plasmídeo útil para ver a função exata do gene de interesse.

Figura_02: Procedimento de subclonagem

Qual a diferença entre clonagem e subclonagem?

- diff Artigo Middle Before Table ->

Cloning vs Subcloning
A clonagem é o procedimento que produz organismos ou células geneticamente idênticos.	A subclonagem é um procedimento de mover um gene de interesse de um vetor para outro vetor para ver a expressão do gene para obter a funcionalidade desejada do gene.
Processo
Separar o DNA de interesse do organismo e inserido em um vetor uma vez e clonado	O DNA já clonado é separado do primeiro vetor e inserido em um segundo vetor e clonado.
Inserir movimento através de vetores
Não move inserções (DNA de interesse) de um vetor para outro vetor.	Mover as inserções do vetor pai para o vetor de destino.

Resumo - Cloning vs Subcloning

A clonagem cria células ou organismos geneticamente idênticos com o gene inserido ou DNA de interesse.Ele prossegue através da separação e inserção do DNA de interesse em um vetor e expressão dentro de uma bactéria hospedeira. O subclonamento compartilha etapas semelhantes com a clonagem. No entanto, na subclonagem, o fragmento de ADN já clonado (gene de interesse) é inserido num vector e transformado numa bactéria hospedeira. Essa é a principal diferença entre clonagem e subclonagem.

Referências

1. Lodish, Harvey. "Clonagem de DNA com vetores plasmídicos". "Biologia Molecular Celular". 4ª edição. U. S. Biblioteca Nacional de Medicina, 01 de janeiro de 1970. Web. 05 de março de 2017
2. "Subcloning. "Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 de fevereiro de 2017. Web. 06 de março de 2017
3. "Subcloning. "Subclonagem | Artigos de acesso aberto | Revista de acesso aberto | Procedimentos de Conferência | Editores | Autores | Revisores | eventos científicos. N. p., n. d. Rede. 06 de março de 2017
4. Wackerhage, Henning. "Como subclonar. "Como subclonar. N. p., 01 Jan. 1970. Web. 06 de março de 2017

Cortesia de imagem

1. Procedimento de clonagem molecular - Por CNX OpenStax [CC BY 4. 0], via Wikimedia Commons
2. Procedimento de subclonagem - Por O remetente original foi Takometer na Wikipedia em inglês (Transferido de en. wikipedia para Commons.) [CC BY 2. 5], através do Wikimedia Commons